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详细介绍
9N 2.0 DNA连接酶试剂(又名9oN DNA Ligase)能够催化磷酸二酯键的形成,使与同一互补靶 DNA 链杂交的两条相邻寡核苷酸链的5?-磷酸末端和3?-羟基末端通过磷酸二酯键相连。该酶来源于极度耐热的海底超嗜热古菌(Thermococcus sp.)9°N 菌株中克隆的连接酶基因,在 45℃-70℃ 范围内均有活性。该酶进一步经基因工程基因突变,使得耐受更高的温度,在95℃孵育5min后活性几乎无损失,因此其适用于:
(1)高温条件下,连接顿狈础链上的切刻位点
(2)适用LCR反应(Ligase Chain Reaction)
(3)适用MLPA反应(Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification)
活性定义
1单位指 20μl反应体系中,50℃条件下,15分钟内能使50%的1pmol的接头片段(12 bp 粘性末端)发生连接所需要的酶量。
储存
-20℃可保存两年。
9N 2.0 DNA连接酶试剂恒温扩增使用策略及实例展示
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
应用实例3:A3825-01 红黄变色反应(肉眼观察)
以 体外转录 RNA 为模板,1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起
始前,下图为 65 度反应 30min 后。
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