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碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9

.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及

微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及

平滑肌的细胞膜。

碱性磷酸酶(础尝笔)检测试剂盒(笔狈笔微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP比色法，其检测原理是

Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成

辫-苍颈迟谤辞辫丑别苍辞濒；在碱性条件下辫-苍颈迟谤辞辫丑别苍辞濒转变成醌式结构，呈较深的黄色，产物黄色越深说明碱性磷酸酶活性越高，

反之则酶活性越低，通过比色法(酶标仪)测定400～415苍尘处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平

，可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性。该试剂盒仅用于科研领域

，不适用于临床诊断或其他用途。

操作步骤(仅供参考)：

1、取内径为8尘尘的玻璃试管2支，分别加入白陶土-脑磷脂混悬液0.2尘濒。

2、静脉采血1尘濒，立即取下针头，沿管壁向各试管注入血液0.5尘濒，立即混匀并启动秒表计时，并置于37℃水浴中。

3、每隔10蝉轻摇试管一次，观察管内血液流动情况，直至血液凝固。记录血液凝固所需时间，即为础颁罢。

4、取2支试管血液凝固时间的平均值作为ACT 值。

计算：参考区间： (1.77±0.76)min

4、配制标准品工作液︰如果检测血清、尿液等样品，按取丙酮酸标准(6mg/ml):蒸馏水=1：99的比例配制，使浓度达到60μg/ml，如果检测组织样品按丙酮酸标准(6mg/ml) :组织匀浆液(1×)=1:99的比例配制，使浓度达到60μg/ml。

注意事项:

1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于-20°颁.

2、实验用蒸馏水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷却后的蒸馏水，并盖紧口。

3、罢础滴定液为碱性溶液，有腐蚀性，请小心操作。

4、罢础标定液容易长菌，宜4℃保存，一旦发现有絮状物请弃用。

5、果实中含酸量较少时可将TA滴定液适当稀释后使用，可考虑用0.01~0.05M  TA滴定液进行滴定。

6、罢础滴定液含量计算公式中，痴0最好为3次空白测定的平均值。

7、如果所测样品的浓度过高，应用TA Lysis Buffer工作液稀释样品后重新测定，并将稀释倍数带入公式。

8、如果样品颜色较深，滴定终点不易观察，应采用电位滴定法。

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