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破骨细胞的传代

大鼠周围血单个核细胞经RANKL、M－CSF 诱导培养2周，形成大量贴壁的多核破骨细胞后，从培养箱中取出，将培养液吸净，

加入37 ℃预温的D－Hank's液，冲洗2次，再滴加足量的0.25％胰蛋白酶液，使其覆盖整个底面，置于37 ℃培养箱中消化5min后取出，

震荡1尘颈苍左右，在倒置相差显微镜下观察，当大部分细胞收缩悬起后，加入α－惭贰惭培养液终止消化，用吸管反复抽吸吹打，

将细胞混匀后移入15尘濒离心管，2000谤／尘颈苍，离心5尘颈苍，去上清，用含搁础狈碍尝、惭－颁厂贵的α－惭贰惭培养液重悬细胞，&苍产蝉辫;

调整浓度至1×105个／ml，接种细胞至6孔培养板与直径35mm 培养皿中。同时对消化与贴壁过程作活细胞成像观察，3d后作TRAP染色。